摘要：在《Journal of Endocrinology》雜志刊發(fā)的一篇報(bào)告中，研究人員使用GDS-80低壓基因槍將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入心肌細(xì)胞，遵循制造商的方案。將2微克質(zhì)粒DNA懸浮于5微升PBS中，并在15 psi的氦氣壓力下輸送至培養(yǎng)的心肌細(xì)胞。該方法的轉(zhuǎn)染效率為25%。經(jīng)6小時(shí)AngII刺激后，用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)制備細(xì)胞提取物，并用光度計(jì)測(cè)定雙熒光素酶活性。結(jié)果表明，AngII可增強(qiáng)培養(yǎng)的大鼠心肌細(xì)胞中肌肉抑制素的表達(dá)。AngII誘導(dǎo)的肌肉生長抑制素通過p38-MAP激酶和MEF-2途徑介導(dǎo)。

　　血管緊張素Ⅱ(AngII)在心肌重塑中起重要作用，促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大。肌生長抑制素是肌肉生長的負(fù)調(diào)節(jié)因子，在肥厚和梗死的心臟中增加。由于肌生長抑制素在限制骨骼肌生長中起作用，肥厚心臟中肌生長抑制素的上調(diào)可能代表心肌細(xì)胞中肌生長抑制素抑制心肌細(xì)胞過度生長的負(fù)反饋機(jī)制。

　　在《Journal of Endocrinology》雜志刊發(fā)的一篇報(bào)告中，實(shí)驗(yàn)人員發(fā)現(xiàn)機(jī)械拉伸是通過 p38 MAP 激酶和 MEF-2 途徑誘導(dǎo)肌生長抑制素表達(dá)。AngII對(duì)心肌細(xì)胞myostatin表達(dá)的直接影響尚未被研究。AngII誘導(dǎo)培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞myostatin蛋白表達(dá)呈劑量依賴性。AngII以時(shí)間依賴的方式顯著增加myostatin蛋白和mRNA的表達(dá)。在AngII刺激前30分鐘加入氯沙坦、SB203580或p38 siRNA可顯著阻斷AngII對(duì)肌生長抑制素蛋白的增加。AngII顯著增加p38的磷酸化，而SB205380和氯沙坦則減弱AngII誘導(dǎo)的p38的磷酸化。AngII增加，而myostatin Mut質(zhì)粒、SB203580、氯沙坦和心肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2(MEF-2)抗體可抑制myostatin啟動(dòng)子活性。myostatin和AngII共刺激顯著抑制AngII誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)合成。

　　研究人員構(gòu)建了一個(gè)-1977至+32bp的小鼠肌生長抑制素啟動(dòng)子。肌生長抑制素蛋白啟動(dòng)子包含MEF-2保守位點(diǎn)(ctaataa)，位于-637到-646bp之間。對(duì)于突變體，使用突變?cè)噭┖袑?duì)MEF-2結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行突變。DNA測(cè)序證實(shí)了位點(diǎn)特異性突變。使用GDS-80低壓基因槍將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入心肌細(xì)胞，遵循制造商的方案。將2微克質(zhì)粒DNA懸浮于5微升PBS中，并在15 psi的氦氣壓力下輸送至培養(yǎng)的心肌細(xì)胞。該方法的轉(zhuǎn)染效率為25%。經(jīng)6小時(shí)AngII刺激后，用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)制備細(xì)胞提取物，并用光度計(jì)測(cè)定雙熒光素酶活性。

　　在這項(xiàng)研究中，研究人員證明了 AngII 上調(diào)了心肌細(xì)胞中肌生長抑制素的表達(dá)，并且 p38 MAP 激酶和 MEF-2 轉(zhuǎn)錄因子參與了肌生長抑制素誘導(dǎo)的信號(hào)通路。心肌細(xì)胞通過肥大生長對(duì)增加的機(jī)械負(fù)荷和激素刺激作出反應(yīng)，但機(jī)械應(yīng)力或激素因素也是觸發(fā)心肌細(xì)胞退化和死亡的初始步驟的重要刺激，這在適應(yīng)不良的心肌重塑和心力衰竭中起關(guān)鍵作用。

　　在沒有 AngII 刺激的情況下，外源性添加肌肉生長抑制素對(duì)心臟肥大沒有影響。這些結(jié)果表明 AngII 對(duì)肥大和肌生長抑制素表達(dá)的作用是違反直覺的。盡管 p38 MAP 激酶是幾乎所有真核細(xì)胞類型中生長和應(yīng)激刺激的重要傳感器，但 p38 MAP 激酶信號(hào)在心臟肥大中的作用仍存在爭議。

　　SB203580是p38 MAP激酶的強(qiáng)效特異性抑制劑，完全抑制AngII誘導(dǎo)的肌生長抑制素表達(dá)，而PI-3激酶抑制劑不具有抑制作用，JNK和p42/p44 MAP激酶抑制劑具有部分抑制作用。這些數(shù)據(jù)暗示 p38 MAP 激酶途徑，而不是 JNK、p42/p44 MAP 和 PI-3 激酶途徑是介導(dǎo) MEF-2 轉(zhuǎn)錄活性增加的重要信號(hào)通路。

　　總結(jié)起來，AngII可增強(qiáng)培養(yǎng)的大鼠心肌細(xì)胞中myostatin的表達(dá)。AngII誘導(dǎo)的肌肉生長抑制素通過p38-MAP激酶和MEF-2途徑介導(dǎo)。

　　[1] Angiotensin II activates myostatin expression in cultured rat neonatal cardiomyocytes via p38 MAP kinase and myocyte enhance factor 2 pathway[J]. Journal of Endocrinology, 2008, 197(1):85-93.