基因工程技術(shù)，在現(xiàn)代植物品種改良的應(yīng)用中愈發(fā)不可或缺。通過基因工程技術(shù)，人類終于可以從上帝視角，將各個不同物種間優(yōu)秀的基因，像搭建樂高積木一樣，設(shè)計改良出具有超級優(yōu)秀基因的新物種，從而造福人類。

　　外源基因想要被快速導入到目標樣本中，經(jīng)常會用到一種通常只有在課本里才出現(xiàn)過的“黑科技”設(shè)備——基因槍。

　　相比農(nóng)桿菌或花粉管通道法介導方式，基因槍投遞外源基因的方式更直接、更快速，因為是通過物理方式把外源基因直接打到樣本上，這種投遞方式可以適應(yīng)幾乎所有目標樣本的基因?qū)搿?/p>

　　但因為基因槍相對高昂的購置成本，國內(nèi)僅有具備一定科研實力的單位才有配備，這也造成了有相關(guān)產(chǎn)品使用經(jīng)驗的人才，相對十分短缺。

　　國際知名的基因槍制造商只有美國WEALTEC公司和美國BIORAD公司這兩個廠家。

　　這兩家公司都是知名分子生物學儀器制造商，且歷史上頗有淵源，據(jù)說，WEALTEC的創(chuàng)始團隊是從BIORAD集體出走創(chuàng)業(yè)創(chuàng)立的品牌，與Biorad這種上市公司走的較為大眾化的通用低端的路線不同，WEALTEC的定位是希望做小而精的細分品類。

　　在基因槍的細分領(lǐng)域，WEALTEC公司的產(chǎn)品是代表最新技術(shù)力量的第三代低壓手持式基因槍GDS-80，BIORAD公司的產(chǎn)品是代表傳統(tǒng)臺式基因槍技術(shù)的PDS-1000。兩款產(chǎn)品都造價不菲，因此很多朋友都沒有機會親眼看過真容。筆者在之前的科研經(jīng)歷中，這兩種型號的產(chǎn)品恰好都有過使用，并且親自操作過相關(guān)課題，這里希望給大家分享一下筆者在這些年來的實際工作經(jīng)驗中，對這兩款產(chǎn)品的實際使用體驗。

　　雖然筆者實驗室早已經(jīng)棄用了老式PDS-1000基因槍，完全投入了GDS-80手持槍的懷抱，但是這里為了給大家提供一個更為客觀公正的使用者視角，下面筆者會從真實的實際操作體驗出發(fā)，為大家盡量客觀全面地展示這兩款產(chǎn)品的真實使用體驗，也希望可以為正在比較調(diào)研兩款產(chǎn)品的同業(yè)朋友們提供一個參考角度。本文所提及的事實性內(nèi)容，均可通過公開信息，如產(chǎn)品說明書、文獻資料中查閱驗證。

　　雖然兩款產(chǎn)品在各類文獻中都多有露面，但是文獻中多為關(guān)于實驗條件的記錄報告，并無人整理過關(guān)于產(chǎn)品實際使用過程和使用體驗的文字內(nèi)容，這也是這篇文章希望為讀者提供的價值所在。

　　實驗室最早配置的是PDS-1000臺式基因槍。當時課題需要將Bt殺蟲基因?qū)胨居鷤M織，因為從水稻成熟胚誘導出的愈傷組織，經(jīng)繼代培養(yǎng)后可以產(chǎn)生大量的胚性愈傷組織，這些愈傷組織用基因槍批量轟擊導入Bt基因，這樣開展實驗效率會很高。愈傷組織通過基因槍轟擊導入Bt基因之后，再通過羧芐青霉素和卡那霉素培養(yǎng)基就可以從樣品中篩選抗性愈傷組織了。

　　PDS-1000的外形是一個臺式的機器，主要分為兩個部分，左半部分需要連接真空泵抽真空的管子，由可以控制真空泵的表頭以及轟擊按鈕等部件構(gòu)成，右半部分是轟擊室，轟擊室里面包括樣品室以及破裂膜載體膜等固定部件。使用時，需要首先連接氦氣瓶和減壓閥，并用塑料PEEK tubing連接減壓閥和氦氣計量閥，再將氦氣計量閥與主機連接(在主機右側(cè)壓力表后面的接口)。主機與氦氣計量閥連接好之后，下一步需要將氦氣計量閥與主機之間的電線連接，PDS-1000因為需要連接真空泵，并且本身也需要電力控制，因此只能在室內(nèi)有電源的固定臺面運行。PDS-1000的轟擊需要抽真空，所以需要連接真空泵，真空泵的管子需要連接到機器左側(cè)后方的真空管連接處。

　　PDS-1000的原理簡單來說是這樣的 ：biorad公司準備了一系列不同規(guī)格的破裂膜(Rupture Disks，分為450 psi,650 psi,900 psi,1100 psi,1350 psi,1550 psi,1800 psi,2000 psi,2200 psi，這9種壓力規(guī)格，每種規(guī)格100片/包裝起購)來控制PDS-1000的轟擊壓力。轟擊時，不同規(guī)格的破裂膜會在不同壓力下爆裂，破裂膜在爆裂時會隨之產(chǎn)生一股強力的震波，這股震波會直沖到下方載體膜(Macrocarriers,500片/包裝起購)的后背，這時，載體膜就會被這股強烈震波重重地一把猛推到下面的阻擋網(wǎng)(Stopping Screens,500片/包裝起購)上。載體膜面向下方的一面，因為預(yù)先涂好了金粉混合液，并且進行過干燥，載體膜猛撞到阻擋網(wǎng)上的瞬間，沾附在載體膜上的金粉運載體，就會通過阻擋網(wǎng)的空隙，被“震”到下方的樣本上，完成對樣本細胞的轟擊。

　　那具體到實際儀器使用時，我們應(yīng)該如何操作呢?首先我們需要將載體膜用異丙醇清洗，然后用機器配的一個紅色小圓柱，把載體膜“懟”進載體膜固定器里固定好，再把金粉溶液涂到載體膜中心的區(qū)域。涂好金粉溶液的載體膜需要放到一個密封小盒子里，小盒子里放上干燥劑，安置在一個穩(wěn)定臺面上，等待金粉溶液干燥。大概等10分鐘左右，金粉溶液就干燥好了。這個載體膜需要在2小時之內(nèi)使用，如果不小心超時，則需要重新準備載體膜。

　　下一步，用消毒好的鑷子，夾一片選好壓力規(guī)格的破裂膜，在異丙醇溶液中涮一下，放進破裂膜固定器里，然后把破裂膜固定器擰到轟擊室上面的槍管上，用扳手擰緊固定器來固定位置。再下一步，把消毒過的阻擋網(wǎng)裝到阻擋網(wǎng)固定器上，再把載體膜固定器上涂有金粉的一面朝向阻擋網(wǎng)，扣在阻擋網(wǎng)固定器上方。注意這里載體膜的方向不要搞錯，否則轟擊時不會有任何一粒子彈被打到樣本上。

　　最后將整個托盤安裝到破裂膜固定器下方，用扳手調(diào)節(jié)好載體膜與上方破裂膜的距離，并固定好托盤。然后，把裝樣品的托盤固定到下方與槍管距離合適的槽里，轟擊室內(nèi)一共有4個高度位置的槽可供選擇。

　　最后，把裝有待轟擊樣品的培養(yǎng)皿，放到樣品盤上。關(guān)閉轟擊室的門，并鎖好。

　　終于到了轟擊的環(huán)節(jié)。如果第一次使用，需要測試一下氣瓶。

　　首先，我們要將轟擊室清空，把左側(cè)機器中間的紅色按鈕撥到VAC檔位，至少達到5英寸汞的真空度。當系統(tǒng)達到了這個最小真空度時，最右面的紅色FIRE按鈕就會燈亮，這時候，我們需要快速地把中間的按鈕撥到最下面HOLD的位置。注意不要在中間的VENT檔位停留，否則會跑掉真空度。這時候用手持續(xù)按住FIRE按鈕，右側(cè)轟擊室上方會開始積累壓力。隨著積累的壓力逐漸上升，上升到破裂膜能承受壓力的上限，這個規(guī)格的破裂膜就會被擠爆。這時需要及時松手FIRE按鈕，避免氦氣浪費。

　　下一步，我們需要把左方機器中間的按鈕撥回到中間的VENT檔位，釋放真空。打開轟擊室，取出樣本，取出阻擋網(wǎng)固定器托盤，擰下載體膜固定器，取出阻擋網(wǎng)和載體膜，擰下破裂膜固定器，用鑷子取出爆掉的破裂膜，更換新的破裂膜、阻擋網(wǎng)和載體膜(重復上述動作)，并進行下次轟擊。

　　如果文字表述的比較抽象，騰訊視頻上搜索PDS-1000是可以找到操作使用視頻的，這里就不再贅述。

　　可以看出，PDS-1000臺式基因槍如果想熟練操作，需要對整個臺式基因槍轟擊原理有著比較清晰的把握。使用時，中間很多操作環(huán)節(jié)如果未按照標準操作步驟執(zhí)行，都容易因為該環(huán)節(jié)的疏漏，導致影響最終轉(zhuǎn)化效果。

　　后期實驗室因為有活體植物葉片轉(zhuǎn)化以及活體芽尖轉(zhuǎn)化的需求，但是這時臺式基因槍已經(jīng)不能滿足這些場景的應(yīng)用了。但幸運的是，在友好單位的推薦下，老板憑借自己的“鈔能力”，幫助實驗室引入了久仰大名的WEALTEC第三代GDS-80手持式基因槍。

　　在GDS-80上市之前，因為沒有其他替代產(chǎn)品，PDS-1000壟斷了整個植物基因槍市場。沒有同類競爭，加上已有商業(yè)專利授權(quán)費用涉及到的背后利益糾葛問題，PDS-1000一直保持著最開始的產(chǎn)品設(shè)計，而這種室內(nèi)固定臺面在密閉空間的轟擊形式，是必然無法對活體植物進行轟擊轉(zhuǎn)化的。同樣地，如果需要對田間作物進行活體花粉轉(zhuǎn)化，為了基因槍轟擊后能夠在保證花粉活性的情況下及時給花朵授粉，這種轉(zhuǎn)化也必然需要在田間進行。

　　那可以對植物活體樣本直接進行轉(zhuǎn)化，并且無需連接外部電力，僅需要通過氦氣純機械動力驅(qū)動的GDS-80低壓基因槍，作為目前唯一的便攜式植物用基因槍，實際操作起來是怎樣的呢?

　　和臺式基因槍不同，GDS-80的樣子看起來真的像是一把“槍”。也因為這個特殊的外觀造型，安裝調(diào)試之前廠家都會使用快遞公司的特安服務(wù)快遞到單位。原因是工程師如果隨身攜帶這個設(shè)備上飛機，經(jīng)常會被機場安檢攔下來拆箱檢查，并進行盤問，即使放到托運行李中也不能幸免于廣播通報檢查。

　　相比PDS-1000復雜的操作步驟，GDS-80應(yīng)該可以說完全不需要安裝調(diào)試即可上手操作。因為是便攜式槍體，GDS-80本身主機是一個高度整合的結(jié)構(gòu)，并沒有多少可以拆裝的部件。把槍體主機直接通過輸氣管連接到氣瓶上的減壓閥，打開氣瓶，通過調(diào)節(jié)減壓閥，設(shè)定好轟擊壓力，就可以扣動扳機直接轟擊了。但是因為產(chǎn)品貨值比較高，必須要進行現(xiàn)場安裝調(diào)試，于是工程師只能以減壓閥的使用為切入點，重點講解減壓閥使用時的注意事項，也是難為人了。

　　還是簡單介紹一下GDS-80的構(gòu)造和原理吧。

　　這款手持式基因槍分為植物專用槍管(核心部件，動物類實驗時可以選配動物用的專用槍管)、槍套(在槍管外保護槍管)、O型密封圈(確保氣密性)、槍體主機、彈簧氦氣輸氣管、帶流量計的減壓閥。因為是便攜式槍體，所以這里氦氣瓶的選擇，可以根據(jù)實驗室的需求選擇大瓶或者小瓶，氣瓶內(nèi)部壓力只要保證在1000psi以上就好，這是為了保證氦氣的純度。

　　如果實驗室在室內(nèi)超凈臺開展的實驗比較多，推薦選擇大體積的氦氣瓶，氣量足，使用時間可以更長，因為是在固定位置使用，所以也不用考慮便攜式的問題;如果實驗室需要在室外作業(yè)、比如去田間進行花粉活體轉(zhuǎn)化或者室外活體植物根莖葉轉(zhuǎn)化，也可以選擇小氣瓶，半個人那么高，很便攜，而且網(wǎng)上就可以買到那種氣瓶手推車，移動起來很方便，使用的時候也很穩(wěn)固。

　　GDS-80的轟擊原理和PDS-1000完全不同，是一款從0開始重新設(shè)計的基因槍產(chǎn)品。

　　基因槍轉(zhuǎn)化法的本質(zhì)邏輯，就是粒子加速，散彈射擊，被打中并且活下來的細胞越多，轉(zhuǎn)化效率就會越高。 基因槍轟擊是一個散彈打靶的邏輯，也就是說，一槍打出去，絕大多數(shù)子彈是無法命中靶心的!有很多子彈根本沒有打中任何細胞，有很多子彈雖然打中了細胞但是卻因為速度太快打穿了，最后跑到了細胞外面，有很多子彈也打中了細胞也留在了細胞質(zhì)中但是卻沒有發(fā)生轉(zhuǎn)化，只有極小一部分的子彈恰好命中細胞核，或者靠著一些機緣巧合的自由擴散運動到了合適的位置，才產(chǎn)生了我們想要的轉(zhuǎn)化，但即使是這樣，還有很多原本可以成功轉(zhuǎn)化的細胞，在轟擊的過程中還不幸被打死了。

　　這也解釋了為什么臺式基因槍要從最開始的火藥推動，逐步演化為現(xiàn)在的氦氣推動。因為火藥爆炸產(chǎn)生的震波更強，對樣本細胞的殺傷力也更大，會造成更大數(shù)量的細胞死亡，轉(zhuǎn)化效率更低。但由于PDS-1000本身槍體的構(gòu)造原理還保持著最原始的火藥基因槍加速方式，也就是靠著高壓震波向下猛推載體膜，因此在使用臺式基因槍進行轟擊時，被轟擊樣本細胞的死亡率一直很高。同時，因為臺式基因槍的粒子加速需要依靠阻擋網(wǎng)，剛性截停高速運動中的載體膜，讓載體膜上附著的金粉微粒靠著自身慣性被甩到下方樣品上，這里不可避免地就會造成一個問題，那就是本就不多的金粉粒子，有多半還被阻擋網(wǎng)攔在了網(wǎng)上沒有打出去，只有阻擋網(wǎng)空隙間漏過去的金粉粒子才能實際產(chǎn)生轟擊。也就是說，在基因槍散彈打靶的過程中，PDS-1000很多子彈并沒有真正地出膛被打出去，而真正打出去的子彈，很多還是直接打到了被震波已經(jīng)震死了的大量細胞尸體上，這些都制約了臺式基因槍的轉(zhuǎn)化效率。

　　GDS-80裝載子彈時，是用移液器吸取了10ul的金粉質(zhì)粒混合液后，直接將金粉混合溶液加到槍管里。槍管中間部位有一個加樣孔，可以根據(jù)一人操作或兩人配合操作的實際場景需要，將槍管加樣孔旋轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)至面向上方(方便助手協(xié)助上樣)或向面向側(cè)面(方便單人操作時平置主機在臺面上樣)。金粉混合液在加樣到槍管中之后，無需等待干燥，即可直接扣動扳機轟擊樣本。

　　GDS-80槍管內(nèi)部結(jié)構(gòu)是拉瓦爾噴管（火箭噴嘴）結(jié)構(gòu)，壓縮氦氣會以亞音速進入槍管，隨著管徑逐漸縮窄，到最窄處（加樣孔位置）時達到音速，隨后金粉溶液會隨著超過音速的氦氣流體，隨著不斷擴大的管徑被進一步加速，最后以超音速的運動狀態(tài)被噴射出槍管，轟擊到樣本表面的細胞上。

　　植物用的GDS-80基因槍型號為GDS-80P，槍管口直徑只有4.5mm，一般距離樣本3-6cm轟擊，對于常見的植物樣品僅需要40-60psi的轟擊壓力。也就是說，同樣10ul的樣品，GDS-80轟擊時，可以將所有子彈幾乎100%的數(shù)量飽和噴射到一小塊非常集中的區(qū)域，并且是通過超低的氣體壓力推送，從而避免了高壓震波對樣品細胞造成的大規(guī)模殺傷。

　　這也是為什么在引入了GDS-80之后，很多實驗室即使在做愈傷組織或種胚類的傳統(tǒng)臺面基因槍轟擊時，也會首選使用GDS-80來做。因為一方面GDS-80基因槍的轉(zhuǎn)化效率要顯著高于臺式基因槍，這當然是最核心的原因;而另一方面可能更為實際的原因是，很多實驗室因為人員的流動，過去熟練掌握臺式基因槍的人離開原單位后，新人確實很難掌握PDS-1000的使用，而不熟練的誤操作會進一步影響臺式基因槍的轉(zhuǎn)化效率。隨著引入GDS-80，很多實驗室的PDS-1000基因槍都套上了防塵罩，靜靜地被收納了起來。

　　不需要通過破裂膜來控制轟擊壓力，GDS-80轟擊壓力可以通過減壓閥直接調(diào)節(jié)需要的轟擊壓力。一般轟擊植物樣本時，我們會根據(jù)既往案例進行對比，選擇40-60psi的轟擊壓力進行條件優(yōu)化。隨機器標配的減壓閥是自帶流量計的減壓閥，通過調(diào)節(jié)流量計旋鈕，可以控制每槍轟擊的氣體流量在10-15L/min，以達到最佳加速效果。

　　GDS-80基因槍主機后方還有一個螺旋結(jié)構(gòu)控制的針狀微量調(diào)節(jié)閥，可以通過旋緊旋松這個調(diào)節(jié)閥來調(diào)節(jié)噴射的氣量，一般情況下根據(jù)轟擊壓力，按照說明書的推薦松緊度調(diào)節(jié)就行，如果遇到較脆弱的樣品，需要減少轟擊氣量時，僅需要將微量調(diào)節(jié)閥調(diào)緊即可。

　　如果使用相同質(zhì)粒通過GDS-80轟擊樣本，不同轟擊之間僅需要對著空地或塑料袋放三個空槍，高速氦氣氣流即可將槍管中殘余的金粉顆粒清除干凈，重新上樣即可進行下次轟擊;如果中途需要更換轟擊不同質(zhì)粒，為避免污染，我們會采用加酒精加水并放空槍重復三次的步驟，來進行快速清洗槍管，也很方便。但我個人感覺，不同基因間轟擊這樣的清洗操作更多是一個科學感官上嚴謹?shù)牧鞒蹋驗殡m然我知道GDS-80的轉(zhuǎn)化能力很強，但其實槍管中殘留的本就微量樣品，如果都能真正被意外地轉(zhuǎn)化進樣本里去，我覺得這比中彩票的概率還是低多了。

　　使用結(jié)束后，關(guān)閉氣瓶閥門，反復插拔輸氣管與GDS-80主機的連接處，將多余氣體釋放出來，直到壓力表清零即可。

　　每次使用完后，槍套旋擰下來，將槍管取出，槍管槍套放到70%酒精溶液中(或者我習慣使用99%酒精溶液)超聲震蕩30分鐘進行清洗，清洗后風干收好即可(酒精很容易揮發(fā)，甩幾下就干了)。這里需要注意的是槍管內(nèi)部是經(jīng)過鏡面處理過的，只能使用超聲波清洗，千萬別用試管刷進去刷。

　　可以看出來，整個GDS-80的使用過程中，不僅操作簡便容易掌握，操作效率高節(jié)省人力，最重要的是轉(zhuǎn)化效率也更高，而且全程不涉及到任何一次性耗材。

　　我們從基因槍法的原理上可以看出來，基因槍不會是打一槍就完事兒的。如果是一個轉(zhuǎn)化類課題，我們一次肯定要做好2000槍的準備?；驑尵褪且粋€散射，多打，多篩選的技術(shù)手段。PDS-1000每槍的一次性使用成本，金粉、破裂膜、載體膜、阻擋網(wǎng)，大致需要80-100元人民幣，而GDS-80一槍的成本只有金粉，大約20元人民幣，如果使用鎢粉轟擊，成本則幾乎可以忽略不計。所以從TCO (Total Cost of Ownership 總體擁有成本) 角度衡量，PDS-1000的價格實在是高的離譜，我甚至懷疑有一天BIORAD公司會不會走打印機廠商的路線，以幾乎白給的價格賣機器，然后靠耗材繼續(xù)保持盈利(事實上，在GDS-80上市之后，PDS-1000主機的價格也的確在一路下調(diào))。但有趣的是，高耗材成本有時反而在機構(gòu)銷售的市場推廣上是優(yōu)勢，我一個在某科研所里工作的朋友跟我講過，不需要耗材的設(shè)備他都持反對態(tài)度，不然后面耗材的經(jīng)費哪里來?你品，你細品。

　　下面我想盡量客觀地談?wù)勎覍@2款均頗有歷史地位的人類基因?qū)氪髿⑵鳟a(chǎn)品的使用感受。

　　首先，對于PDS-1000這款產(chǎn)品，我是心存感恩的。

　　自從1987年康奈爾大學Sanford教授發(fā)明基因槍以來，逐步從火藥動力改進到氦氣動力，原型原理一直都沒有變過。也就是說，如果沒有當時杜邦公司對該產(chǎn)品進行商業(yè)化推廣，廣大科研從業(yè)者是用不上這款產(chǎn)品的。即使到現(xiàn)在，杜邦公司依然持有著該基因槍的發(fā)明專利，由BIORAD公司貼牌授權(quán)銷售，也就是說，如果實驗室超過一般科研用途，希望將這款產(chǎn)品商用或?qū)⒊晒M行商業(yè)轉(zhuǎn)化，所獲得的商業(yè)收益需要與杜邦分成，前車之鑒可以參考《未能完成支付 杜邦就"技術(shù)使用費"起訴孟山都》。上世紀90年代，我國基因工程類的基礎(chǔ)百廢待興，亟需引入國外先進科學儀器的支援，大量科研機構(gòu)和大學，就是因為那時大批量配備了PDS-1000這款產(chǎn)品，才大大加速了我們國家基礎(chǔ)科研的進程。想想要是沒有基因槍，別說當年農(nóng)桿菌侵染單子葉植物的問題還未解決，單子葉植物基因轉(zhuǎn)化工作不能順利開展，就是你驗證幾個基因片段的瞬時表達，想想沒有基因槍的話需要多花多少工夫吧!

　　但是時代在發(fā)展，科技在進步，新技術(shù)終究會代替老技術(shù)走向前臺。

　　GDS-80上市之后，越來越多地走進了新建的實驗室中來。即便是我這種頂著“會操作各類復雜儀器”光環(huán)的老玩家，也不得不含淚把臺式機雪藏到柜子里(據(jù)我看到的周圍不少實驗室也是這么做的)。畢竟人生苦短，做實驗的時間是自己的，誰會和自己的時間過不去呢?更高的轉(zhuǎn)化效率，更快速直接的操作使用體驗，更低的使用成本，這些僅僅還只是GDS-80通過重構(gòu)了基因槍的設(shè)計原理就能帶來的好處。然而植物基因槍從臺式到便攜式發(fā)展所帶來的影響，還遠不止這些。

　　就通過基因槍做轉(zhuǎn)化植株來說，目前較為成熟的路徑有三種：1. 轉(zhuǎn)化愈傷組織通過組培得到后代 ? 2. 田間轉(zhuǎn)化活體花粉通過直接授粉得到轉(zhuǎn)化種子 ? 3. 田間通過轉(zhuǎn)化活體植株芽尖分生組織培養(yǎng)轉(zhuǎn)化植株。

　　這三種途徑，臺式基因槍僅能幫助實驗室通過第一種途徑完成轉(zhuǎn)化，而GDS-80卻可以覆蓋以上所有應(yīng)用。

　　中國農(nóng)業(yè)科學院棉花研究所(中棉所)在2013年發(fā)布的《棉花的基因槍活體快速轉(zhuǎn)化方法》，開發(fā)出了通過第三代低壓手持式基因槍GDS-80進行的活體花粉轉(zhuǎn)化體系，后期并將基于該成果的《Cloning of SjCA gene and its expression analysis on upland cottons》發(fā)表在《Journal of Biomedical Engineering and Informatics》上。

　　另外，能夠在活體植物上進行一些瞬時表達實驗，也可以大大簡化實驗設(shè)計。比如國立臺灣大學植物生物學研究所在《PLoS Genetics》上發(fā)布的一項報告中，課題組在IbNAC1啟動子的-1484到-1479bp之間發(fā)現(xiàn)了一個創(chuàng)傷反應(yīng)性G-box順式作用元件。從傷口激活的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選中，選擇出了一個轉(zhuǎn)錄激活子IbbHLH3和一個阻遏子IbbHLH4，分別結(jié)合并激活或抑制IbNAC1啟動子中的G-box模體以調(diào)節(jié)IbNAC1介導的反應(yīng)。課題組使用GDS-80基因槍傳遞系統(tǒng)通過粒子轟擊法在甘薯葉片中瞬時表達了35S::YFP-IbbHLH3或35S::YFP-IbbHLH4。結(jié)果表明，IbbHLH3的存在增加了IbNAC1的表達。相反，與EV植物相比，IbbHLH4過表達植物中IbNAC1的表達受到抑制。課題組通過活體植物基因槍轉(zhuǎn)化，快速搭建了這項可以精確轉(zhuǎn)換IbNAC1表達調(diào)控機制的基因模型，并且向我們展示了植物中又一個精美的防御調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

　　以上，是我個人這些年來一線工作中總結(jié)出來的一些心得體會，有幸能夠發(fā)起這個話題供大家參考，作為一個終端使用者分享了我對GDS-80基因槍與PDS-1000基因槍的一些對比評測體驗。也希望以后可以在更多的地方，能更多地聽到一些我們生命科學行業(yè)里有質(zhì)量、有價值的聲音!